由于猪炭疽多呈慢性或隐性，临诊症状不明显，急性病例也少见，发生炭疽或疑似炭疽时禁止剖检，炭疽病的正确诊断十分重要，所以必须进行实验室检查，血清学诊断。
1、临诊症状及流行情况调查
临诊症状的诊断价值不大，调查某些地区有否炭疽病发生、是否炭疽的疫源地等资料，可供诊断参考。
2、细菌抹片、镜检
简便的方法是死猪耳静脉或四肢末梢的浅表血管采取血液、水肿液，或脾脏及病变器官组织制成涂片，用姬姆萨或瑞氏染色液或碱性美蓝染色，用显微镜检查，可以看到单个或短链(2～4个菌体)相连有荚膜的两端平截竹节状大杆菌，即可确诊。
猪体局部淋巴结涂片，炭疽的菌体形态常不典型，呈粗细不一菌链扭转状，菌体消失，可见荚膜“菌影”。
3、细菌分离培养
采取新鲜病料接种于普通琼脂平皿培养，若是污染或陈旧病料，可先做成悬液，70℃加热30min，杀死非芽孢菌后再接种培养；若为腐败病料，可先做成1:10乳剂接种小鼠，然后再取病料接种培养。根据菌落生长的特征做出判定。
如要与类属的蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌区分，可进行7噬菌体裂解试验、荚膜形成试验及炭疽串珠试验。
4、动物感染试验
将病料用无菌生理盐水稀释5～10倍，对小鼠皮下注射0.1～0.2mL，或豚鼠0.2～0.5mL，或家兔1mL，经24～36h(小鼠)或2～4天(豚鼠、家兔)被接种动物死亡。死亡动物的脏器、血液等抹片，经瑞氏染色镜检，可见多量有荚膜的成短链的炭疽杆菌。死亡动物可见注射部位胶样浸润和脾脏肿大。也可用病料进行培养及炭疽沉淀反应检查。 imuyi.com
5、炭疽沉淀反应(Ascoli氏反应)
取病死猪的组织数克，剪碎或捣烂，加5～10倍生理盐水，煮沸10～15min，冷后过滤或离心沉淀，用毛细吸管取上清液，沿管壁慢慢加入已装有炭疽沉淀素血清(成品)的细玻璃管内，形成整齐的两层液面，在两液的接触面出现清晰的白色沉淀环判为阳性(反应在1～2min内出现，最好在10～15min观察)。
这个反应特异性高，操作简便、迅速，检出率高，即使腐败的炭疽病料，仍可出现阳性反应。县、乡兽医院(站)平时购入一定数量的沉淀血清，放冰箱保存备用，对及时确诊本病有现实意义。
6、酶联免疫吸附试验(ELISA)、聚合酶链反应(PCR)等也可用于炭疽病的诊断。
