依据本病的流行病学特点、临诊症状以及中枢神经系统的病理组织学变化，可以初步诊断。但最终确诊需进行病原的分离鉴定。
可从早期表现脑脊髓炎症状的仔猪的脊髓、脑干或小脑无菌取组织制成悬液接种于原代猪肾细胞培养(也可以接种于PKl5细胞)，出现病变后再传3代使其稳定，用猪传染性脑脊髓炎阳性血清做中和试验进行鉴定。
或将病脑接种易感猪，接种猪若出现与自然病例相同的症状和病理变化则可确诊。病毒鉴定可以用荧光抗体染色或免疫酶染色。急性期和恢复期猪血清抗体可用中和试验和ELISA试验的方法进行抗体检测。
通常病猪在发生麻痹前6～9天血清中的中和抗体滴度可达1：256。康复猪体内的中和抗体最短也可持续280天。检测时一般中和滴度为1：64可判为阳性，1：16以上为可疑。
猪传染性脑脊髓炎应与具有相似或相同临诊症状的疾病如猪伪狂犬病、猪血凝性脑脊髓炎进行区别。 imuyi.com
